大家好，今天小编来为大家解答饲料蛋白质滴定这个问题，饲料中钙的测定 络合滴定法很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

饲料中钙的测定 络合滴定法

饲料中钙的测定方法

1主题内容与适用范围

本标准规定了饲料中钙的测定方法

本标准适用于配合饲料,单一饲料和浓缩饲料

2方法原理

将试样中有机物破坏,使钙溶解制备成溶液,用三乙醇胺,乙二胺,盐酸羟胺和淀粉溶液消除干扰离子的影响,在碱性溶液中以钙黄绿素为指示剂,用EDTA标准溶液络合滴定钙,可快速测定钙的含量

3试剂

本附录中所用试剂除特殊要求处,均为分析纯,水为蒸馏水或同纯度水.

3.1盐酸羟铵

3.2盐酸1+3（V1+V2）

3.3氢氧化钾溶液200克/L

3.4三乙醇胺水溶液1+1

3.5乙二胺水溶液（1+1）

3.6淀粉溶液,10克/L,称取1克可溶性淀粉入200ml烧杯中,加5ml水润湿,加95ml沸水搅匀,煮沸冷却备用（现用现配）

3.7孔雀石绿水溶液

3.8钙黄绿素甲基百里香酚蓝指示剂,0.1g钙黄绿素与0.13g甲基百里香酚蓝,5g氯化钾研细混匀,贮存于磨口瓶中备用

3.9钙标准溶液0.0010g/ml,

称取2.497g于105~110℃干燥至恒重的基准碳酸钙,溶于40 ml盐酸中,加热赶除二氧化碳,冷却,用水转移至1000 ml容量瓶中,稀释至刻度.

3.10乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液称取3.8gEDTA入200ml烧杯中加200ml水,加热溶解冷却后转至1000ml容量瓶中,用水稀释到刻度.

3.10.1 EDTA标准滴定溶液的标定.

准确吸取钙标准溶液10ml按试样测定法进行测定

3.10.2 EDTA滴定溶液对钙的滴定度按式计算:

T=C×V/（V1—V0）

式中：T—EDTA标准溶液对钙的滴定度g/ml

c—钙标准溶液的浓度g/ml

v—所取钙标准溶液的体积,ml

v1—EDTA标准滴定溶液的用量,ml

V0—滴定空白时的EDTA标准滴定溶液的用量,ml

4仪器和设备

4.1实验室用样品粉碎机或研钵

4.2分样筛孔径0.45mm（40目）

4.3分析天秤感量0.0001g

4.4高温炉电加热,可控温度在550±20℃

4.5坩埚瓷质

4.6容量瓶100 ml

4.7滴定管酸式25或50 ml.

4.8玻璃漏斗6cm直径

4.9定量滤纸中速,9cm.

4.10移液管10,20ml

4.11凯氏烧瓶250或500ml.

5试样的制备

取具有代表性样品,粉碎至40目,用四分法缩分至200 g,装于密封容器,防止试样成分变化或变质.

5.1试样的分解（本标准中建议使用干法）

称取2~5 g样品于坩埚中精确至0.0002 g,在电炉上小心炭化,再放入高温炉于550℃下灼烧3小时,（或测定粗灰份后连续进行）在盛灰坩埚中加入盐酸溶液10ml和浓硝酸数滴,小心煮沸,将此溶液转入容量瓶中冷却至室温,用蒸馏水稀释到刻度,摇匀为试样分解液

6测定

准确移取试样分解液5~25ml（含钙量5~25mg）加水50ml,加淀粉溶液10ml,三乙醇胺2

ml,乙二胺1ml,1滴孔雀石绿,滴加氢氧化钾溶液至无色再过量10ml,加0.1g盐酸羟胺每加一种试剂都必须摇匀,加钙黄绿素用许,在黑色背景下立即用EDTA标准溶液滴定到绿色荧光消失呈现出紫红色为滴定终点.

7滴定结果的表述

Ca%=T×V2×V0×100/(m×v1)

式中T——EDTA标准溶液对钙的滴定度g/ml

V0—试样分解液的总体积,ml

V1—分取试样分解液的体积ml

V2—实际消耗EDTA标准滴定溶液的体积ml

m—试样的质量g

所得结果应表示至二位小数

8重复性

每个试样取两个平行样进行测定.以其算术平均值为结果

含钙量在5%以上,允许相对偏差3%,含钙量5%~1%时,允许相对偏差5%,含钙量1%以下允许相对偏差10%.

用5%预混料配置饲料,粗蛋白含量如何计算

用5%预混料配置饲料，如预混料是买的现成的，它应该附上配方，否则是配不准确的，也无法配出的，因鱼粉、玉米等基础料中含有钙磷，预混料中也含有钙磷，这样就不准了。

配的方法：用鱼粉、玉米等基础料，共占95%,将各种料所占粗蛋白含量相加,使其达到17%，同时代谢能也要达到11.50兆焦/kg。

通过变动各种料用量比例，达到各项营养指标符合标准。如玉米含粗蛋白8.0%,用量为40%，能提供粗蛋白量为8.0%×40%＝3.2%粗蛋白质量。

饲料原料中粗蛋白含量测定的影响因素：

1、粉碎

以豆粕为例：豆粕因为其生物结构特性：表皮较脆软易粉碎，但蛋白含量低；豆粕芯质地较硬难粉碎，蛋白含量高。故实际操作中会出现粉碎不均匀的现象。

2、样品称量

用分析天平准确称取0.2-0.5g（精确到0.0001g），以保证式样的含氮量在30-40mg。使滴定时盐酸滴定液的消耗体积保持在10-20ml之间，会较大程度上避免滴定液体积过小带来的误差，提高结果准确性。

浓缩饲料（粗蛋白含量≥40%），称量范围可在0.2-0.3g之间；配合饲料（粗蛋白含量≤20%），称量范围可在0.4-0.5g之间。

3、消化时间及温度

消化时间要达到4h，时间不充分会造成消化不完全，消化时间过长会造成蛋白的损失已及浪费能源。

要使消化温度达到420℃，使消化完全，温度低会造成消化不完全，温度过高会使氮气逸出影响结果。

扩展资料：

蒸馏时间对粗蛋白含量测定结果的影响：

把握好蒸馏时间，适宜的时间是5min。低于5min，结果蛋白质含量偏低；高于5min对结果没有明显改善，还会造成时间和资源的浪费。严格把控蒸馏时间，保证结果准确性。

加入碱的浓度：

选用40%的NaOH水溶液50ml，分5次加入，使其充分与试样溶液反应，从蓝绿色变成黑色。只有与NaOH溶液充分反应，才能使氨气充分逸出。

滴定原理：

用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。

在滴定过程中，滴定终点采用甲基红-溴甲酚绿混合指示剂颜色变化来判断。测定出的含氮量是样品的总氮量，包括有机氮和无机氮。

如何检测家禽类饲料中的粗蛋白

凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。

2、试剂

2.1硫酸（GB 625）：化学纯，含量为98％，无氮。

2.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3—920）或硫酸钠（HG 3—908），均为化学纯，磨碎混匀。 2.3氢氧化钠（GB 629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。 2.4硼酸（GB 628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。

2.5混合指示剂：甲基红（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。

2.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。 2.6.1盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL盐酸（GB 622，分析纯），注入 1 000mL蒸馏水中。

2.6.2盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL盐酸（GB 622，分析纯），注入1 000mL蒸馏水中。 2.7蔗糖（HG 3—1001）：分析纯。 2.8硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。

2.9硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1 000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。

3、仪器设备

3.1实验室用样品粉碎机或研钵。 3.2分样筛：孔径0.45mm（40目）。 3.3分析天平：感量0.0001g。 3.4消煮炉或电炉。

3.5滴定管：酸式，10、25mL。 3.6凯氏烧瓶：250mL。

3.7凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。 3.8锥形瓶：150、250mL。 3.9容量瓶：100mL。 3.10消煮管：250mL。

3.11定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动。

4、试样的选取和制备

选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。

5分析步骤

5.1.1试样的消煮

称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。

5.1.2氨的蒸馏：

将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。

5.1.2.3蒸馏步骤的检验

精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按5.1.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

5.1.3滴定

用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L（4.6.2）盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

6、空白测定

称取蔗糖0.5g，代替试样，按第5章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL。

7、分析结果的表述

7.1计算见下式：

粗蛋白质（％）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V＇/V）×100式中：V2──滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL； V1──滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL； c──盐酸标准溶液浓度，mol/L； m──试样质量，g；

V──试样分解液总体积，mL； V──试样分解液蒸馏用体积，mL；

0.0140──与1.00mL盐酸标准溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量。

6.25──氮换算成蛋白质的平均系数。

7.2重复性

每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在25％以上时，允许相对偏差为1％。当粗蛋白含量在10％～25％之间时，允许相对偏差为2％。当粗蛋白质含量在10％以下时，允许相对偏差为3％。

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