今天给各位分享饲料厂常用蛋白检验方法的知识，其中也会对饲料中真蛋白的检测方法进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！
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凯氏定氮法网上没找到，就自己打了一份
饲料中纯蛋白质（真蛋白）的测定
一、测定原理
饲料蛋白质经沸水提取并在碱性溶液中被硫酸铜沉淀。过滤和洗涤后，可将纯蛋白质和非蛋白质含氮物分离，再用凯氏定氮法测定沉淀物中的蛋白质含量。
二、仪器设备
（1）烧杯：200ml
（2）定型滤纸
（3）其他设备与粗蛋白质测定法相同
三、试剂与配制
（1）100g.L-1硫酸铜溶液；分析纯硫酸铜（5水硫酸铜）10g溶于100ml水中
（2）25g.L-1氢氧化钠溶液：将2.5g分析纯氢氧化钠溶于100ml水中
（3）10g.L-1氯化钡溶液：1g氯化钡溶于100ml水中
（4）2mol.L盐酸溶液
（5）其他试剂与粗蛋白质测定法相同
四、测定步骤
准确称取试样1g左右（精确至0.0001g）置于200ml烧杯中，加50ml水中，加热至沸。
加入20ml硫酸铜溶液，20ml氢氧化钠溶液，用玻璃棒充分搅拌，放置1h以上。用定性滤纸过滤，然后用60~80摄氏度热水洗涤沉淀5或6次，用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤纸，直至不生成白色硫酸钡沉淀为止。将沉淀和滤纸放在65摄氏度烘箱干燥2h，然后全部转移到凯氏烧瓶中，按半微量凯氏定氮法进行氮的测定。
测定菌体蛋白饲料中的真蛋白含量是为了确保饲料的营养价值和质量。含有真菌的菌体蛋白饲料中，真蛋白的测定常用的方法是基于凯氏定氮法（Kjeldahl method）。
1.样品制备:
取适量菌体蛋白饲料样品，粉碎至一定粒径。
2.蛋白质水解:
在酸性环境中高温加热样品，使其中的蛋白质水解为氨基酸。
3.氨的蒸馏:
通过蒸馏，将产生的氨从样品中蒸馏出来，并在酸性溶液中被捕获。
4.滴定测定:
使用标准的酸溶液滴定被捕获的氨，从而计算出蛋白质含量。
5.计算:
根据氨的量计算真蛋白的含量。通常，每16克氮代表100克蛋白质。
注意:这种方法测定的是总氮含量，从中估算蛋白质含量。可能并不完全等于真蛋白的实际含量，因为饲料中可能还含有其他非蛋白质形式的氮。其在农业和饲料工业中得到了广泛的应用，因为它是测定蛋白质含量的标准方法，并且相对简单和准确。
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凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
2、试剂
2.1硫酸（GB 625）：化学纯，含量为98％，无氮。
2.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3—920）或硫酸钠（HG 3—908），均为化学纯，磨碎混匀。 2.3氢氧化钠（GB 629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。 2.4硼酸（GB 628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。
2.5混合指示剂：甲基红（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
2.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。 2.6.1盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL盐酸（GB 622，分析纯），注入 1 000mL蒸馏水中。
2.6.2盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL盐酸（GB 622，分析纯），注入1 000mL蒸馏水中。 2.7蔗糖（HG 3—1001）：分析纯。 2.8硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。
2.9硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1 000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。
3、仪器设备
3.1实验室用样品粉碎机或研钵。 3.2分样筛：孔径0.45mm（40目）。 3.3分析天平：感量0.0001g。 3.4消煮炉或电炉。
3.5滴定管：酸式，10、25mL。 3.6凯氏烧瓶：250mL。
3.7凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。 3.8锥形瓶：150、250mL。 3.9容量瓶：100mL。 3.10消煮管：250mL。
3.11定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动。
4、试样的选取和制备
选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。
5分析步骤
5.1.1试样的消煮
称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
5.1.2氨的蒸馏：
将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
5.1.2.3蒸馏步骤的检验
精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按5.1.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。
5.1.3滴定
用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L（4.6.2）盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
6、空白测定
称取蔗糖0.5g，代替试样，按第5章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL。
7、分析结果的表述
7.1计算见下式：
粗蛋白质（％）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V＇/V）×100式中：V2──滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL； V1──滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL； c──盐酸标准溶液浓度，mol/L； m──试样质量，g；
V──试样分解液总体积，mL； V──试样分解液蒸馏用体积，mL；
0.0140──与1.00mL盐酸标准溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量。
6.25──氮换算成蛋白质的平均系数。
7.2重复性
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在25％以上时，允许相对偏差为1％。当粗蛋白含量在10％～25％之间时，允许相对偏差为2％。当粗蛋白质含量在10％以下时，允许相对偏差为3％。
饲料中蛋白溶解度常用测定方法主要有体外消化率法和酶解法，pH溶解法辅助验证。
检测原理是通过模拟动物胃部环境或化学条件，测试蛋白质分解程度。以下是关键操作步骤：
1.体外消化率法：
•取5克饲料样本，研磨后加入胃蛋白酶溶液，37℃恒温水浴震荡2小时。
•过滤未溶解残渣，烘干称重，溶解蛋白占比=（初始蛋白量-残渣蛋白量）/初始蛋白量×100%。
2.酶解法（参考国标）：
•使用胰蛋白酶替代胃蛋白酶，调节溶液pH至7.5，45℃反应4小时，后续步骤与体外消化法类似。
3. pH溶解法（快速筛选）：
•将饲料粉末与pH 2.0盐酸溶液混合，静置30分钟后离心，通过凯氏定氮法计算上清液中的蛋白含量。
影响结果的关键因素包括粉碎细度（建议过60目筛）和酶活稳定性。例如，豆粕的高温加工可能导致蛋白变性，溶解度过低则影响动物吸收。建议结合两种方法比对结果，实验室常用体外消化率法，养殖场可用pH法做简易预判。
若原料存放超3个月，建议复测溶解度，因湿度或霉菌可能破坏蛋白结构。玉米、菜籽粕的溶解度差异较大，需分类记录数据。
OK，关于饲料厂常用蛋白检验方法和饲料中真蛋白的检测方法的内容到此结束了，希望对大家有所帮助。
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