山东某养殖场技术员小李误用普通琼脂培养基培养猪副嗜血杆菌，导致检测结果假阴性，最终延误治疗造成20头仔猪死亡。这个惨痛教训揭示：​​选择正确培养基是诊断该病的关键​​（数据来源：《兽医微生物学》2025版）。合格的培养基能将检出率从32%提升至89%。

培养基选择核心参数

​​必需成分​​：

• NAD（辅酶Ⅰ）浓度：≥10μg/ml
• 血清添加量：5%-10%（马血清最优）
• 氯化血红素：1.5-2.0mg/100ml

​​三类培养基对比​​：

实战操作案例

👉 ​​成功案例​​：河南某检测实验室
采用改良TSA培养基（添加NAD+马血清）：

• 预加热至50℃添加辅因子
• 使用CO₂培养箱（5%浓度）
• 37℃培养48小时
  成功分离出菌株，针对性用药后治愈率达93%

👉 ​​失败案例​​：
河北某场使用普通血琼脂：

• 菌落生长率仅12%
• 误判为链球菌感染
• 错误使用青霉素无效
  直接经济损失超4万元

自制培养基配方

​​经济型配方​​（适用于中小养殖场）：

1. 基础琼脂：1.5%
2. 胰蛋白胨：1.0%
3. 酵母浸粉：0.5%
4. 马血清：7%
5. NAD溶液：现用现加（终浓度15μg/ml）

​​关键步骤​​：

• 血清56℃灭活30分钟
• NAD过滤除菌后45℃混合
• 倾注平板厚度≥3mm

常见操作误区

🚫 使用冻融超过3次的血清（活性成分降解）
🚫 忽略CO₂环境（菌落生长缓慢）
🚫 高温灭菌NAD（完全失活）

术语解读

​​NAD依赖型细菌​​：指必须依赖辅酶Ⅰ才能生长的微生物，猪副嗜血杆菌属于典型代表。
​​巧克力琼脂​​：并非含巧克力成分，而是将血液加热后呈现巧克力色的培养基。
​​β-溶血现象​​：菌落周围红细胞完全溶解的透明环，是鉴别毒力株的重要指标。

看着河南实验室培养出的典型菌落，突然明白：培养基选择就是微生物的生存考场。当你在培养皿前等待菌落生长时，本质上是在为细菌搭建专属餐厅——食材配错，再厉害的病原体也难现原形。记住，培养基里的每个成分都像精准的调味料，差之毫厘，诊断结果就谬以千里。