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酸溶蛋白是较低分子量的蛋白水解物,包括肽和游离氨基酸,它是一种可以溶于酸性溶液的蛋白。
粗蛋白只是一个粗略的概念,粗蛋白的定义就是饲料样品中的氮含量乘以系数6.25。大多数蛋白质一般都含16%的氮,该系数即由此推导而来。 将饲料中氮的百分含量乘以100÷16,或者说乘以6.25,就可算出粗蛋白含量。
凯氏法测定试样中的含氮量,即在催化剂作用下,用硫酸破坏有机物,使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,再用酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数6.25,计算出粗蛋白含量。
2、试剂

2.1硫酸(GB 625):化学纯,含量为98%,无氮。
2.2混合催化剂:0.4g硫酸铜,5个结晶水(GB 665),6g硫酸钾(HG 3—920)或硫酸钠(HG 3—908),均为化学纯,磨碎混匀。 2.3氢氧化钠(GB 629):化学纯,40%水溶液(m/V)。 2.4硼酸(GB 628):化学纯,2%水溶液(m/V)。
2.5混合指示剂:甲基红(HG 3—958)0.1%乙醇溶液,溴甲酚绿(HG 3—1220)0.5%乙醇溶液,两溶液等体积混合,在阴凉处保存期为三个月。
2.6盐酸标准溶液:邻苯二甲酸氢钾法标定,按GB 601制备。 2.6.1盐酸标准溶液:c(HCl)=0.1mol/L。8.3mL盐酸(GB 622,分析纯),注入 1 000mL蒸馏水中。
2.6.2盐酸标准溶液:c(HCl)=0.02mol/L。1.67mL盐酸(GB 622,分析纯),注入1 000mL蒸馏水中。 2.7蔗糖(HG 3—1001):分析纯。 2.8硫酸铵(GB 1396):分析纯,干燥。

2.9硼酸吸收液:1%硼酸水溶液1 000mL,加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL,0.1%甲基红乙醇溶液7mL,4%氢氧化钠水溶液0.5mL,混合,置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。
3、仪器设备
3.1实验室用样品粉碎机或研钵。 3.2分样筛:孔径0.45mm(40目)。 3.3分析天平:感量0.0001g。 3.4消煮炉或电炉。
3.5滴定管:酸式,10、25mL。 3.6凯氏烧瓶:250mL。
3.7凯氏蒸馏装置:半微量水蒸气蒸馏式。 3.8锥形瓶:150、250mL。 3.9容量瓶:100mL。 3.10消煮管:250mL。

3.11定氮仪:以凯氏原理制造的各类型半自动。
4、试样的选取和制备
选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g,粉碎后全部通过40目筛,装于密封容器中,防止试样成分的变化。
5分析步骤
5.1.1试样的消煮

称取试样0.5~1g(含氮量5~80mg)准确至0.0002g,放入凯氏烧瓶中,加入6.4g混合催化剂,与试样混合均匀,再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠,将凯氏烧瓶置于电炉上加热,开始小火,待样品焦化,泡沫消失后,再加强火力(360~410℃)直至呈透明的蓝绿色,然后再继续加热,至少2h。
5.1.2氨的蒸馏:
将试样消煮液冷却,加入20mL蒸馏水,转入100mL容量瓶中,冷却后用水稀释至刻度,摇匀,做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴,硫酸数滴,在蒸馏过程中保持此液为橙红色,否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10~20mL注入蒸馏装置的反应室中,用少量蒸馏水冲洗进样入口,塞好入口玻璃塞,再加10mL氢氧化钠溶液,小心提起玻璃塞使之流入反应室,将玻璃塞塞好,且在入口处加水密封,防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸馏1min,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入锥形瓶内,然后停止蒸馏。
5.1.2.3蒸馏步骤的检验
精确称取0.2g硫酸铵,代替试样,按5.1.2步骤进行操作,测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%,否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

5.1.3滴定
用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L(4.6.2)盐酸标准溶液滴定,溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
6、空白测定
称取蔗糖0.5g,代替试样,按第5章进行空白测定,消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL。
7、分析结果的表述

7.1计算见下式:
粗蛋白质(%)=(V2-V1)·c×0.0140×6.25/(m×V'/V)×100式中:V2──滴定试样时所需标准酸溶液体积,mL; V1──滴定空白时所需标准酸溶液体积,mL; c──盐酸标准溶液浓度,mol/L; m──试样质量,g;
V──试样分解液总体积,mL; V──试样分解液蒸馏用体积,mL;
0.0140──与1.00mL盐酸标准溶液〔c(HCl)=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量。
6.25──氮换算成蛋白质的平均系数。

7.2重复性
每个试样取两个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在25%以上时,允许相对偏差为1%。当粗蛋白含量在10%~25%之间时,允许相对偏差为2%。当粗蛋白质含量在10%以下时,允许相对偏差为3%。
凯氏定氮法网上没找到,就自己打了一份
饲料中纯蛋白质(真蛋白)的测定
一、测定原理

饲料蛋白质经沸水提取并在碱性溶液中被硫酸铜沉淀。过滤和洗涤后,可将纯蛋白质和非蛋白质含氮物分离,再用凯氏定氮法测定沉淀物中的蛋白质含量。
二、仪器设备
(1)烧杯:200ml
(2)定型滤纸
(3)其他设备与粗蛋白质测定法相同

三、试剂与配制
(1)100g.L-1硫酸铜溶液;分析纯硫酸铜(5水硫酸铜)10g溶于100ml水中
(2)25g.L-1氢氧化钠溶液:将2.5g分析纯氢氧化钠溶于100ml水中
(3)10g.L-1氯化钡溶液:1g氯化钡溶于100ml水中
(4)2mol.L盐酸溶液

(5)其他试剂与粗蛋白质测定法相同
四、测定步骤
准确称取试样1g左右(精确至0.0001g)置于200ml烧杯中,加50ml水中,加热至沸。
加入20ml硫酸铜溶液,20ml氢氧化钠溶液,用玻璃棒充分搅拌,放置1h以上。用定性滤纸过滤,然后用60~80摄氏度热水洗涤沉淀5或6次,用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤纸,直至不生成白色硫酸钡沉淀为止。将沉淀和滤纸放在65摄氏度烘箱干燥2h,然后全部转移到凯氏烧瓶中,按半微量凯氏定氮法进行氮的测定。
饲料中蛋白溶解度常用测定方法主要有体外消化率法和酶解法,pH溶解法辅助验证。

检测原理是通过模拟动物胃部环境或化学条件,测试蛋白质分解程度。以下是关键操作步骤:
1.体外消化率法:
•取5克饲料样本,研磨后加入胃蛋白酶溶液,37℃恒温水浴震荡2小时。
•过滤未溶解残渣,烘干称重,溶解蛋白占比=(初始蛋白量-残渣蛋白量)/初始蛋白量×100%。
2.酶解法(参考国标):

•使用胰蛋白酶替代胃蛋白酶,调节溶液pH至7.5,45℃反应4小时,后续步骤与体外消化法类似。
3. pH溶解法(快速筛选):
•将饲料粉末与pH 2.0盐酸溶液混合,静置30分钟后离心,通过凯氏定氮法计算上清液中的蛋白含量。
影响结果的关键因素包括粉碎细度(建议过60目筛)和酶活稳定性。例如,豆粕的高温加工可能导致蛋白变性,溶解度过低则影响动物吸收。建议结合两种方法比对结果,实验室常用体外消化率法,养殖场可用pH法做简易预判。
若原料存放超3个月,建议复测溶解度,因湿度或霉菌可能破坏蛋白结构。玉米、菜籽粕的溶解度差异较大,需分类记录数据。

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