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猪场常用兽药有哪些 常用兽药有哪些

作者:饲料巧配 时间:2026-02-03 阅读:223

其实猪场常用兽药有哪些的问题并不复杂,但是又很多的朋友都不太了解常用兽药有哪些,因此呢,今天小编就来为大家分享猪场常用兽药有哪些的一些知识,希望可以帮助到大家,下面我们一起来看看这个问题的分析吧!

猪场常用兽药有哪些 常用兽药有哪些

本文目录

  1. 常用兽药有哪些
  2. 国内养猪常用的饲料添加剂有哪些
  3. 猪病常用的血清学诊断方法有哪些

常用兽药有哪些

问题一:常用兽药包括以下哪些一.肠道,大肠杆菌.沙门氏菌用磷杆清四代,

二.球虫:小肠球虫用小青衣,盲肠驱虫用大红袍,

三.腺肌胃炎:腺胃炎用腺胃舒,肌胃炎用加强胃康灵,

四.呼吸道:支堵用支呼清,支原体用胡爽,

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五.抗病毒:抗病毒用终结者,新城疫用新流恨,

六.一切都在东东商城,确实实惠好用哦。

问题二:常用药物有哪些家庭常备药:

治感冒类药:如扑尔敏、新康泰克、速效伤风胶囊、强力银翘片、白加黑感冒片、盐酸吗啉胍片等。

清热解毒类药:黄连上清丸、牛黄解毒片等

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止咳化痰药:如必嗽平、咳必清、蛇胆川贝液、复方甘草片等。

抗菌药物:如氟哌酸、环丙沙星、乙酰螺旋霉素、氨苄西林等。

胃肠解痉药:如普鲁本辛654-2等。

助消化药:如多酶片、山楂丸等。

通便药:如果导片、大黄苏打片、甘油栓、开塞露等。

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止泻药:如易蒙停、止泻宁、黄连素等。

抗过敏药:如塞庚啶、扑尔敏、苯海拉明等。

外用消炎消毒药:酒精、碘酒、红药水、高锰酸钾等。氯霉素眼药水应常备,游泳后滴上几滴。

外用止痛药:如风湿膏、红花油等。

其他基本的医疗用品:体温表、小剪刀、创可贴、镊子、风油精、清凉油、消毒棉签、纱布、胶布等。

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问题三:想问下兽药产品,都包括哪些分类?兽药是指用于预防、治疗和诊断家畜、家禽、鱼类、蜜蜂、蚕以及其它人工饲养的动物疾病,有目的地调节其生理机能并规定作用、用途、用法、用量的物质(包括饲料添加剂)。

兽药包括以下三大类:

(1)血清、菌(疫苗)、诊断液等生物制品。

(2)用的中药材、中成药、化学原料药及其制剂。

(3)抗生素、生化药品、放射性药品。

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随着近年来药物使用动物范围的不断扩大及饲料药物添加剂的迅速发展,兽药一词已不能准确地表示所有动物所用的药品。目前,我国正着手起草动物药品法,相信不久我国将会以动物药品取代兽药一词。

问题四:养猪场常用药物有哪些地塞米松磷酸钠。

该药用于治疗炎性、过敏性疾病等,猪的一天用量4毫克~12毫克,以前常用于母畜的同期分娩。近年来,养殖户滥用、超量使用地塞米松的现象比较普遍。如某猪场因哺乳和断乳小猪体温升高,每头小猪的注射量达10毫克~20毫克,甚至连续用药,不仅不能解决疾病的根本问题,而且影响了小猪的成活率和生长发育。

缩宫素注射液。

主要用于母猪助产、催产。目前,养殖户应用该药物主要在分娩前(羊水破后)、分娩中(产下2头仔猪后)和分娩后,每胎必用,存在着由分娩前的助产演变为滞产、难产,大剂量的缩宫素还促进过早泌乳,与哺乳仔猪的需要不协调,甚至造成泌乳抑制或无乳综合征的发生。因此要注意分娩母猪胎位不正、产道狭窄时忌用催产药,建议3胎以上使用缩宫素,于分娩后促进胎衣的排下使用该药为宜。

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青霉素粉针剂。

市场上有青霉素钾、青霉素钠两种产品,需用灭菌注射用水稀释。一些养殖户喜欢选用中药(中草药)针剂类稀释,如麻杏石甘注射液,在气温较低时,容易出现絮状物,以至注射时不能使用;有的用林可霉素注射液稀释,产生浑浊、絮状物或沉淀,严重影响药效;有的用磺胺类药稀释,因磺胺类药注射液为强碱性,与本品混合注射可破坏青霉素的抗菌性。有的养殖户长期选用氨基比林、安乃近等稀释本品,会引起母猪颗粒白细胞减少症,影响免疫效果。

林可霉素注射液。

临诊上用于治疗畜禽革兰氏阴性菌感染,特别是耐青霉素对本品敏感的细菌感染,也可用于防治猪密螺旋体性痢疾、支原体引起的猪喘气病等。有的养殖户用本品注射液给小猪口服,有的注射哺乳仔猪,甚至给妊娠母猪注射而引起不良后果。林可霉素内服能引起马、兔和其他草食动物致死性腹泻、肠壁水肿。给猪注射本品还有疼痛***。

替米考星注射液。

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目前很多兽药厂家都有生产本品,含量有20%和30%两种剂型,多数为复方药,主要用于防治家畜肺炎(由胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌、支原体等感染引起)、禽支原体病及泌乳动物乳腺炎。有的养殖户用本品治疗患畜引起死亡,有的用本品配合氨茶碱一起注射,有的用本品加地塞米松治疗小猪气喘(胸腔积水)而引起死亡。替米考星注射液主要作用心血管系统,可引起心动过速和收缩力减弱,肌肉和皮下注射可出现局部反应(水肿等),要注意使用方法。

氯霉素类。

氯霉素在动物临床上已被禁用,现市场上有甲砜霉素预混剂、氟苯尼考预混剂和氟苯尼考注射液(有10%、20%和30%三种规格)。有的养殖户在小猪饲料内添加高浓度的氟苯尼考预混剂。有的对猪体温一升高、出现呼吸道症状就肌注本品注射液。氟苯尼考虽然不抑制骨髓,但有胚胎毒性,妊娠母猪禁用,有一定的免疫抑制作用。据有关资料报道,氟苯尼考注射液药物浓度在子宫内最高,依次为肺部和肠道,因此要注意配伍应用。

问题五:兽药有哪些制剂兽药的制剂很多,它们都是根据国家药典规范做成的。常用的兽药制剂有以下几种:1芳香水剂芳香水剂是用芳香挥发性药物制成的饱和或接近饱和的水剂,也即水溶液。常用的这类水剂有薄荷水、樟脑水等。

2溶液剂溶液剂是将非挥发性的化学药物溶在水中而成的药物,可供内服或外用。溶液一般澄明;油溶性的溶液则不澄明,如维生素A油溶液。

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3煎剂或浸剂

生药与一定量的水煮若干时间后,所得的药液叫煎剂,大多数的中药都用这种方法煮后服用;如果将生药投入水中浸泡一定时日,所得的药液叫浸剂。煎剂和浸剂都是临用时才煎浸,不耐久藏。

4注射剂注射剂用灭菌方法将药物灌封成安瓿,或装入玻璃瓶中,如日常广泛使用的生理盐水。葡萄糖注射液和各种各样的药物注射液。这类药物的制造工序比较严格。

5散剂散剂是广泛使用的一种药物剂型。药物经过研磨成粉末状,可掺合在饲料或溶于水中喂给动物。

6片剂片剂将一定份量的药物压成片状或粒状使用,经口投服。

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7软膏剂软膏剂以凡士林(黄石脂)为基础,混入定量的药物,制成半固体型制剂,如各种抗生素或磺胺类软膏,供局部外用。

8气雾剂气雾剂将药物溶于水中,通过喷雾器喷出含药气雾,主要用于环境消毒。您看到此篇文章时的感受是:

问题六:老百姓常用的必备药有哪些?盘点家中的必备常用药随着人们生活水平的逐步提高和医药卫生知识的不断普及,人们防病健身的意识加强了,许多家庭都备有药品,使得一些小毛病能得到及时治疗。 任何药物都有两面性,既可治病,又会危害人体健康。所以,应根据家庭人员的健康状况,有针对性地准备少量比较安全有效的常用药物,并学会科学合理地使用。家庭大致可贮备如下几种药品。(1)解热镇痛药:如阿斯匹林、去痛片、消炎痛等。(2)治感冒类药:如扑感敏、康泰克、感冒通、强力银翘片、白加黑感冒片等。(3)止咳化痰药:如必嗽平、咳必清、蛇胆川贝液等。(4)抗生素:如氟哌酸、复方新诺明、乙酞螺旋霉素、先霉素等。(5)胃肠解痉药:如普鲁本辛、654-2等。(6)助消化药:如吗丁啉、多酶片、神曲等。(7)通便药:如果导、大黄苏打片、甘油栓、开塞露等。(8)止泻药:如易蒙停、藿香正气水、十滴水等。(9)抗过敏药:如息斯敏、扑尔敏、苯海拉明等.(10)外用消炎消毒药:酒精、碘酒、紫药水、红药水、高锰酸钾等。(1l)外用止痛药:如风湿膏、红花油等。(12)其他:创可贴、风油精、清凉油、消毒棉签、纱布、胶布等。

问题七:兽医临床常用的大环内脂类药物有哪些时下沿用的大环内酯类有红霉素、麦迪霉素、螺旋霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、柱晶白霉素。至于一些新出的大环内酯类药物(新大环内酯类)也有不少,例如阿奇霉素、克拉霉素、罗红霉素等等,你说的兽医临床用的大环内酯类指的是用在那些方面,小动物医院?还是大动物的畜牧场所?这个我没有看清楚。不过我工作的医院里大环内酯类的药物用得比较少,进货也不多,可能是由于对小动物的肝损伤相比大动物来说比较大,而且耳毒性也有一定的伤害。但这对一些非常规性肺炎,如支原体,衣原体和链球菌引起的化脓性肺炎以及一些常见的眼结膜炎都会采用这类药物。有兴趣的可以联系我,这里实在太多说不完了,纯粹手打,望接纳。 ^-^

问题八:镇咳药可分为哪几类?有哪些常用药物目前常用的止咳药按照它们的作用部位可分为两大类:

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(1)中枢性镇咳药:可直接抑制位于延脑的咳嗽中枢而产生止咳作用,常用的有以下几种。

可待因:止咳作用迅速而强大,口服后大约1小时就可发挥最大效果。适用于各种原因引起的剧烈干咳和***性咳嗽,尤其适用于伴有胸痛的剧烈干咳。由于此药能够抑制气管和支气管粘膜体的分泌和纤毛运动,对有少量痰的剧烈咳嗽,应与祛痰药合用,痰多的病人不能服可待因,否则会使大量痰液阻塞呼吸道。不可长期服用,因可产生耐受性的成瘾性,也可引起便秘。

口服,每次15~30毫克,每日3次。

咳必清:兼有中枢性和末梢性镇咳作用,作用强度约为可待因的1/3,但无成瘾性,一次服药作用可持续4~6小时。多用于治疗上呼吸道感染引起的无痰干咳和百日咳。

口服1~2片,每天3~4次。青光眼病人慎用。

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咳平:可抑制咳嗽中枢,止咳作用较可待因弱,无耐受性及成瘾性。服药后20~30分钟就可见效,作用可持续3~4小时。用来治疗急性上呼吸道感染,慢性支气管炎和结核病所引起的咳嗽。

口服,每次10~30毫克,每天3次,儿童每公斤体重每次1.0毫克,每天3次。

咳快好:兼有中枢性和末梢性止咳作用,作用比可待因强2~4倍,口服后15~20分钟就可见效,作用可持续4~7小时。可用于治疗急性支气管为以及因感染、吸烟、***物、过敏等原因引起的咳嗽、对***性干咳效果更好。

(2)末梢性的止咳药:这类药通过降低呼吸道感觉神经末梢对***的敏感性而产生止咳效果的。常用的有复方甘草合剂,各种止咳糖浆,口服后,能覆盖在发炎的咽部粘膜上,使粘膜少受***,而达到止咳作用。

问题九:常见的激素药有哪些激素药按照起效的长短分为短效、中效、长效三种,短效的有氢化可的松(别名皮质醇、氢化考的松、氢化皮质素、氢可的松)、醋酸可的松(别名醋酸副肾皮质素、醋酸考的松、可的松醋酸酯)等;中效的有泼尼松龙(别名氢化泼尼松、强的松龙、去氢氢化可的松)、泼尼松(强的松、去氢可的松、甲基强的松龙(甲基去氢氢化可的松、美卓乐、舒禄-美卓乐)等;长效的有地塞米松(氟美松、德萨美松、地卡特隆、斯诺迪清)、倍他米松(β-米松、β-美松、贝皮质醇、贝氟美松)、曲安西龙(去炎松、阿塞松、氟羟强的松龙、氟羟氢化泼尼松Triamcino1one)、曲安奈德(曲安缩松、去炎舒松、去炎松-A)、倍氯米松(丙酸倍氯美松、丙酸培氯松、必可酮、伯可纳、安德心)等。

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常见的激素药按照药物起效的强弱度分为极效、强效、中效、和弱效四类。极强效:恩肤霜、氟轻松(适确得)、卤倍他索(索康)、特美肤、皮康王等;强效的激素药包括:肤轻松、乐肤液、氯氟舒松、肤康王等;中效的激素药包括派瑞松、皮康霜、艾洛松、去炎松、皮炎平)等;常见的弱效的激素药包括:点必舒、尤卓尔、百力物、艾氟龙、肤乐霜等。

这些常见的激素药主要以外用药最为多见,主要是用于皮肤病的外用药膏和滴眼础。这些药物虽然有很大的作用,但是激素药的副作用也是不可小视的。因此在使用激素药的时候一定要慎重。

国内养猪常用的饲料添加剂有哪些

饲料中一般含有水分、蛋白质、脂肪、矿物质、碳水化合物、维生素等机体所需的六大营养成分。养猪常用的饲料主要有以下几种:

(1)蛋白质饲料:如鱼粉、豆粕(饼)、花生饼、血粉、肉粉、酵母、棉籽粕(饼)、菜子粕(饼)等。

(2)能量饲料:如玉米、稻谷、大麦、红薯等。

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(3)粗饲料:如干草、秕壳、砻糠等。

(4)青饲料:如青草、野菜、水生饲料、块根、块茎等。

(5)青贮饲料:如青贮玉米秸、青贮花生秧、青贮苜蓿草等。

(6)矿物质饲料:用于补充微量元素的饲料,如食盐、贝壳粉、蛋壳粉、骨粉、石粉等。

(7)饲料添加剂:一般分为营养性添加剂和非营养性添加剂两大类。营养性添加剂主要有维生素、微量元素、氨基酸等;非营养性添加剂主要包括促长剂、驱虫剂、保存剂、食欲增进剂及产品质量改良剂等。

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正确的供水方法:料水分开,喂饲干料(配合饲料或全价颗粒饲料),若用自拌料喂猪,可采用湿拌料(料水比为1∶1~1.5),喂后供给足够的饮水。

猪病常用的血清学诊断方法有哪些

抗原和相应的抗体在动物体内或体外都能发生特异性结合反应,这种反应称为抗原抗体反应,习惯上把体内的抗原抗体反应称为免疫反应,体外的抗原抗体反应称为血清学反应,因为抗体主要存在于血清中。

血清学反应可以用已知的抗体检查未知的抗原,也可用已知抗原测定未知的抗体。人们根据抗体能与相应抗原发生反应并出现可见的抗原—抗体复合物的原理,设计了许多血清学诊断方法,不仅可以检测动物体内乃至体外的病原微生物,或其抗原性成分,而且还可以测定动物机体对病原微生物的侵袭或对其抗原成分的免疫反应。在抗原—抗体复合物成不可见状态时,可以通过琼脂扩散、凝集实验以及酶标记等指示系统,使其变为可见或可测状态。

目前已知的血清学诊断方法很多,现仅介绍几种在目前条件下规模化猪场通过学习都能做到的诊断方法:

(1)凝集试验猪病诊断过程中常用的操作方法有以下几种:

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①全血平板凝集试验实践中主要用于细菌性疾病的抗体检测和抗原(经分离培养后)的鉴定。现举例用已知猪丹毒抗原(丹毒杆菌的纯培养液)测定被检猪血清中的抗体。其操作步骤如下:

a.材料猪丹毒凝集抗原,玻片,9号针头,酒精棉球,酒精灯,铂耳(取血环)等。b.操作用铂耳取已知抗原1滴,置于玻片上。用酒精棉球擦拭针头,铂耳在酒精灯上灼烧消毒。用针头刺破被检猪的耳静脉,以铂耳取血与玻片上的抗原等量混合,在2~3分钟内观察结果。c.结果判定出现颗粒状的凝集,为阳性反应。否则为阴性。

②试管凝集试验是一种定量法,用于测定被检血清或其他体液中有否某种抗体及其效价,可做临床的辅助诊断,或用于流行病学监测。在猪场中,本法常用于猪布氏杆菌病的诊断。

A.材料布氏杆菌病试管凝集抗原(1∶20倍稀释),布氏杆菌病阳性血清、阴性血清(1∶25倍稀释),稀释液(0.5%石炭酸生理盐水),灭菌小试管,1毫升吸管,试管架,待检血清等。B.操作取试管7支置于试管架上,设阳性和阴性血清及抗原对照各1支,测定管4支,以后每增加1个样品,只需增加4支测定管。

按表10示意稀释血清,加抗原,完成后每支试管内应含1毫升液体。

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表10布氏杆菌试管凝集反应(单位:毫升)

试管号 1 2 3 4 5 6 7血清稀释倍数 1∶25 1∶50 1∶100 1∶200阳性血清对照1∶25阴性血清对照1∶25抗原对照0.5%石炭酸生理盐水 1.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5待检血清 0.5 0.5 0.5 0.5抗原(1∶20稀释) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5弃0.5弃0.5加入抗原后,将试管充分振荡,置于37℃温箱反应24小时后,判定结果。C.判定标准“-”液体均匀混浊,管底无凝集物,不凝集。

“+”液体透明度较差,管底有少量凝集物,为25%凝集。

“++”液体中等浑浊,管底有中等量的伞状沉淀,50%菌体凝集。

“+++”液体几乎透明,管底有明显伞状沉淀,75%菌体凝集。

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“++++”液体完全透明,管底出现大片的伞状沉淀,100%菌体凝集。

结果判定:已出现50%菌体凝集的血清最高稀释度为该血清的凝集价。在检测猪布氏杆菌病时,血清凝集价在1∶50以上时,可判为阳性反应。若凝集价为1∶25,则为可凝集(需重复试验1次)。如猪群中基本无阳性反应。则凝集价1∶25也可判为阴性。

③间接红细胞凝集实验(简称间接血凝试验)

该试验能大大提高反应的敏感性。用抗体致敏红细胞检测相应的抗原,称为反向间接血凝试验;反之,称为正向间接血凝实验。在猪病的诊断中,常采用本法对猪口蹄疫、水泡病、猪瘟、传染性胸膜肺炎等疾病抗原的鉴定,或抗体的检测。现举例猪口蹄疫的抗体检测(正向间接血凝),操作步骤如下:

A.目的检测被检血清样品中猪口蹄疫抗体的效价。B.材料猪口蹄疫(O型)正向间接血凝标准致敏红细胞(由兰州兽医研究所提供),标准阳性阴性血清,稀释液,96孔“V”形有机玻璃微量血凝板,微量加样器,滴头,被检血清等。C.操作将待检血清置60℃水浴中灭活30分钟,用微量加样器对血凝板上的每孔加入25微升稀释液,取25微升待检血清加到第一孔,用加样器以吸入与排出的动作混合3~4次,取出25微升放入第二孔混匀,依次到第九孔,取出25微升弃掉。血清稀释度从第一到第九孔分别为1∶2,1∶4,1∶8,1∶16,1∶32,1∶64,1∶128,1∶256,1∶512(第一排的10~12孔设阳性血清对照、阴性血清对照和抗原对照)。每孔加入25微升致敏红细胞,振荡1~2分钟,置37℃温箱或室1~2小时或更长时间,然后判定结果。D.判定标准“-”红细胞沉底,呈圆点状,不凝集。

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“+”红细胞大部分集中于中央,周围只有少数凝集,即25%凝集。

“++”红细胞呈薄层凝集,中心致密,边缘分散,即50%凝集。

“+++”红细胞凝集程度较上有所增加,即75%凝集。

“++++”红细胞呈薄层凝集,布满整个孔底或边缘,蜷曲呈荷包蛋边状,即100%凝集。

结果判定:以出现50%凝集(++)的血清最高稀释度,为该血清的间接血凝价。

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④血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验在猪的传染病中,细小病毒感染、乙型脑炎、伪狂犬病等,适宜进行血凝和血抑试验,本试验以检测猪细小病毒血清抗体为例,介绍如下:

A.材料猪细小病毒浓缩诊断抗原,豚鼠沉积红细胞配成的0.5%悬液。稀释液、标准阳性和阴性血清、被检血清、96孔V形有机玻璃微量血凝板、25~50微升微量移液管、微量振荡器、普通离心机等。B.试验方法a.血凝(HA)试验用滴管在96孔血凝板上以第一孔至试验所需要稀释倍数孔,每孔滴加稀释液25微升,用移液器从第一孔开始依次稀释,置微量振荡器上振荡15秒,最后每孔滴加0.5%豚鼠红细胞25微升,振荡30分钟,置室温(20℃左右)1小时后判定。b.血凝抑制(HI)试验被检猪血清先经56℃、30分钟灭活,然后加入50%豚鼠红细胞(最终浓度)和等量的高岭土,摇匀后放室温15分钟,经2000转/分离心10分钟,取上清液以除掉血清中非特异性的凝集素和抑制素,然后用稀释液将每份处理过的血清1∶5~1∶10至240倍比稀释,在向每孔加入等量4个血凝单位的标准血凝素(抗原),混匀后置室温1小时,加入新配制的0.5%豚鼠红细胞悬液,混匀后置室温2小时,判定结果,同时设阳性、阴性血清及红细胞和抗原的对照,HI抗体滴度≥1∶20者为阳性,猪感染PPV后7天左右可检出HI抗体,12~14天可达1∶1024~5000。

⑤乳胶凝集试验(LAT)

本法在猪病中主要作用于伪狂犬病和猪萎缩性鼻炎的诊断,是用其病毒或细菌致敏乳胶抗原来检测被检猪的血清、全血或乳汁中的抗体,具有简便、快速、特异、敏感的优点。

A.材料伪狂犬病毒致敏乳胶抗原,伪狂犬病阳性血清、阴性血清、稀释液,玻片,吸头,被检血清或全血或乳汁(通常采初乳,经3000转/分钟离心,取上清液做待检样品)。B.试验方法a.定性试验取被测样品(血清,全血或乳汁)、阳性血清、阴性血清、稀释液各1滴,分置于玻片上,各加乳胶抗原1滴,用牙签混匀,搅拌并摇动1~2分钟,于3~5分钟内观察结果。b.定量试验先将血清在微量反应板或小试管内作连续倍比稀释,各取1滴依次滴加于乳胶凝集反应板上,另设对照(同上),随后各加乳胶抗原1滴。如上搅拌并摇动,然后判定。

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C.结果判定首先对照组要出现如下结果,本试验才能成立:阳性血清加抗原呈“++++”,阴性血清加抗原呈“-”,抗原加稀释液呈“-”。

“++++”全部乳胶凝集,颗粒聚集于液滴边缘,液体完全透明。

“+++”大部分乳胶凝集,但颗粒明显,液体稍混浊。

“++”约50%乳胶凝集,但颗粒较细,液体较混浊。

“+”仅有少许凝集,液体混浊。

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“-”液滴呈原有的均匀乳状。

以出现“++”以上凝集者,判为阳性凝集。

注意事项:试剂盒应在2~8℃冷暗处保存,暂定1年。乳胶抗原为乳白色状液体,如出现分层,使用前轻轻摇匀。

(2)沉淀实验具体方法有多种,如环状沉淀实验、琼脂扩散实验和免疫电泳等。在猪病的诊断中,目前最常用的是琼脂扩散实验,现以检测伪狂犬病的抗体为例,将其操作方法介绍如下:

A.材料伪狂犬病标准抗原,阳性血清,阴性血清,待检血清(56℃灭能30分钟),生理盐水,打孔器,微量移液器,培养皿,琼扩琼脂(配制方法:含有0.1%石炭酸的磷酸缓冲盐水,加入1%的优质琼脂,在沸水中融化均匀,若有杂质,须用纱布过滤,然后分装于盐水瓶内,保存备用)。B.操作a.浇琼脂板和打孔将已融化的琼脂趁热倒入平皿,制成3毫米厚的琼脂板,待凝固后进行打孔。一组共7个孔,中间1孔,孔径4毫米,孔距3毫米。用打孔器打孔,剔出孔内的琼脂然后将琼脂板在酒精灯上来回过2~3次,使琼脂与玻板之间的空隙封闭。b.向孔内加样中央孔加抗原,外周孔第1,5孔加阳性和阴性血清作对照,第2,3,4,6孔加待检血清。将加完样的琼脂平皿加上盖子,置37℃恒温箱扩散24~36个小时,然后判定结果。C.结果判定首先检查标准阳性血清孔和抗原孔之间是否出现明显的致密的白色沉淀线,而阴性孔则不出现,只有在对照组出现正确结果的前提下,被检孔才可参照标准判定。

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注意事项:

第一,琼扩所用的琼脂必须是优质的琼脂粉,若用普通的琼脂条,应事先净化精制。精制的简易方法是:取条状琼脂24克,加蒸馏水1000毫升,在沸水中融化,趁热倒入搪瓷盘中,待冷却后切成1平方厘米大小的琼脂块,用蒸馏水或无离子水浸泡2~3天,每天换水4~5次,然后将处理好的琼脂块隔水融化,加入0.1%石炭酸磷酸缓冲盐水,配成1%琼脂。

第二,制备琼脂板应在水平台上进行,防止薄厚不匀。板的厚度要求一致(7.5厘米的平皿,用15毫升琼脂液)。浇制时防止产生气泡。平皿浇制的琼脂板在4℃冰箱内可保存15天。

第三,打孔的孔径、孔距力求准确、合适。

第四,孔中滴加抗原和血清时,孔内必须加满而又不能外溢。加样时不能带进小气泡。

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(3)酶联免疫吸附试验(ELISA)

它是根据抗原与抗体特异性结合的功能,以酶做标记物,利用酶对底物具有高效催化作用的原理而设计的。它既可以用于抗原的诊断,也可进行血清抗体的检测,可达到定性和定量的目的。已广泛地用于传染性疾病的诊断,血清流行病学调查和抗体水平的评价等。

目前在兽医防治的研究和实践中,对于猪瘟、伪狂犬病、繁殖障碍与呼吸综合征、流行性腹泻、旋毛虫病、猪气喘病等疾病,均采用免疫酶技术进行病原诊断、抗体检测和血清学流行性调查,并且已成为规模化猪场化验室工作的一项重要内容。利用免疫酶技术测定抗原和抗体的方法很多,下面简要介绍3种适合猪场使用的免疫酶技术。

①斑点酶联免疫吸附实验(Dot—ELISA)

A.材料硝酸纤维滤膜(孔径0.45微米),0.01摩/升、pH7.2的磷酸盐缓冲盐水,封闭液(磷酸盐缓冲盐水加入10%马血清或0.1%明胶),30%双氧水(H2O2),3,3′-二甲基联苯胺(DAB)抗原液,阴性对照,待检液,待检血清,阳性血清及阴性血清,酶标兔抗猪免疫球蛋白G(IgG),0.05摩/升三羟甲氨基甲烷—盐酸缓冲液,洗涤液(磷酸盐缓冲盐水加入0.05%吐温-20)。B.检测抗原操作第一,硝酸纤维薄膜(NCM)的处理:在滤膜上划6毫米×6毫米的方格,在方格中央用蘸水笔末端压成圆形痕迹。置于蒸馏水中浸泡10分钟,取出后晾干备用。

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第二,点样:取1毫升待检液在硝酸纤维滤膜圆圈内点样,同时设立阳性与阴性对照,自然干燥或置于37℃温箱中干燥。

第三,封闭:将硝酸纤维滤膜置于封闭液中,37℃、30分钟,用洗涤液洗涤1次,约3分钟。

第四,加猪阳性血清,将硝酸纤维薄膜置于猪阳性血清中,37℃作用1小时,取出用洗涤液洗涤3次,每次3分钟。

第五,加酶标兔抗猪免疫球蛋白G,37℃作用1小时,然后洗涤3~4次,每次3分钟。

第六,加底物溶液(0.05摩/升三羟甲氨基甲烷—盐酸缓冲液100毫升,加3,3′-二甲基联苯胺40毫克,30%双氧水50微升),作用5~10分钟。

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第七,终止显色,将硝酸纤维滤膜置于蒸馏水中冲洗2~3分钟。

第八,自然干燥,或37℃下干燥。

第九,判定标准:

“-”不呈现斑点,与阴性对照相同。

“+”斑点较弱或沉淀内有不均质的棕色点。

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“++”斑点浅棕色,对比度清晰。

“+++”介于++和+++两者之间。

“++++”斑点深棕色,背景白色。

出现阳性反应的血清最高稀释度为该血清的Dot—ELISA效价。

第十,注意事项:试验中的点样抗原、血清及酶标抗体的稀释度,应根据预备试验确定;试验中应使用不溶性供氢体;如3,3′-二甲基联苯胺,4-氯-1-萘酚等,不能使用可溶性供氢体;根据试验的目的要求,确定检测抗原或抗体;封闭液可使用异种动物血清、牛血清蛋白(BSA)或明胶溶液等进行封闭,根据预备试验选择最佳封闭条件。C.检测抗体操作第一,硝酸纤维滤膜的处理,同检测抗原。

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第二,点样,取已知抗原液点样,自然晾干或37℃干燥。

第三,封闭,同检测抗原。

第四,将点样后的硝酸纤维滤膜按点样格子剪成小块,置入系列稀释液的待检血清(1∶10,1∶50,1∶100,1∶200,1∶400,1∶800,1∶1600,1∶3200,1∶6400,1∶12800)中,同时设立阳性和阴性血清对照,37℃作用1小时,然后用洗涤液洗涤3次,每次3分钟。

第五,以下均同检测抗原第六、第七、第八、第九、第十项操作。

②酶联免疫吸附实验(ELISA)

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现介绍猪病诊断常用的两种方法:

A.间接法将已知抗原吸附(或称包被)与固相载体,孵育后洗去未吸附的抗原,随后加入含有特异性抗体的被检血清,感作后洗涤未起反应的物质,加入酶标抗同种球蛋白(如被检血清是猪血清,则需用抗猪球蛋白),感作后再经洗涤,加入酶底物,底物分解后出现颜色变化,颜色变化的速度及程度,与样品中的抗体量有关,即样品中的抗体愈多,颜色出现愈快、愈深。

a.材料0.05摩/升、pH9.6碳酸盐缓冲液,稀释液用0.01摩/升、pH7.2磷酸缓冲盐水(含0.13摩/升氯化钠,0.5%犊牛血清),洗涤液用0.01摩/升、pH7.2磷酸盐缓冲盐水(含0.13摩/升氯化钠,0.05%吐温-20),30%双氧水,邻苯二胺(OPD),pH5.0磷酸二氢钠—柠檬酸缓冲液,2摩/升硫酸,抗原,阳性血清,阴性血清,待检血清,酶标兔抗猪免疫球蛋白,40孔聚苯乙烯联板,酶联免疫检测仪。b.操作第一,用碳酸盐缓冲液配置一定浓度的抗原包被液包被酶联板,每孔100微升,置37℃条件下2小时,或在4℃冰箱内过夜。

第二,倾去孔内液体,用洗涤液加满各孔,洗涤3次,每次3分钟,然后倾尽洗涤液。

第三,除调零孔外,其余孔加入用稀释液稀释的待检血清,每孔100微升,同时设立阳性、阴性血清对照,置37℃下反应1.5小时。

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第四,抗体效价测定。将待检血清进行血清进行倍比稀释,每份血清加两排孔,即同一稀释度的血清加上下相邻的两个孔,每孔100微升,凋零孔不加血清。同时设立阳性、阴性血清对照。置37℃反应1.5小时。

第五,洗涤同第二。

第六,除调零孔外,每孔加入酶标记兔抗猪免疫球蛋白G 100微升,置37℃下反应1.5小时。

第七,洗涤同第二。

第八,每孔加入新配置的底物溶液(取邻苯二胺40毫克,溶于100毫升pH5.0的磷酸盐—柠檬酸缓冲液,临用前加入30%双氧水0.15毫升)100微升,室温下观察显色(5~30分钟)。

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第九,每孔加入50微升,2摩尔/升硫酸终止反应。

第十,用酶联免疫检测仪测定每孔490纳米波长的光密度(OD)值。

B.夹心法本法是检测抗原的方法,将特异性免疫球蛋白吸附于固相载体表面,然后加入含有抗原的溶液,使抗原和抗体在固相表面形成复合物,洗除多余的抗原,再加入酶标记的特异性抗体,感作后冲洗,加入酶的底物,颜色的改变与被测样品中的抗原量成正比。

a.材料同间接法。b.操作(以检测猪瘟病毒抗原为例)

第一,抗体包被:将一定溶度的猪瘟高免血清(用碳酸盐缓冲液进行稀释)包被酶联板,每孔100微升,置37℃下反应2小时,或4℃冰箱中过夜。

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第二,洗涤:同间接法。

第三,加被检样品,除调零孔外,每份样品加2个孔,每孔加100微升,同时设立阳性抗原、阴性抗原对照,酶结合物对照(抗体加磷酸盐缓冲盐水加酶结合物),置37℃下反应1.5~2小时。

第四,洗涤,同第二。

第五,加底物溶液,同间接法第八。

第六,同间接法第九。

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第七,同间接法第十。

C.结果判定常用的判定方法有3种。

阴阳性表示法:待检样本吸收值:规定吸收值≥0.2~0.4为阳性。规定吸收值等于阴性样本平均吸收值加SD(标准差)。

阳性阴性比(P/N)法:样本吸收值/阴性样本平均吸收值≥2~3者为阳性。

终点表示法:以出现阳性反应的样本最高稀释度,为该样本的滴度。D.注意事项第一,包被过程中以高pH和低离子强度的条件为佳,包被浓度在1~100毫克/毫升选择最佳浓度。

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第二,血清或抗原稀释液应含5%~10%异种动物血清,或1%牛血清白蛋白,或0.5%明胶,以起封闭作用,防止非特异性反应,否则应在第二与第三步之间加封闭液进行封闭。

第三,洗涤要充分,酶结合物应按照要求进行稀释和使用,底物溶液一定要现配现用。

第四,显色时阴性对照刚出现微黄色时,应立即终止反应。

第五,用阳性阴性比方法判定结果时,阴性对照孔若小于0.1,则易出现误判。

第六,用自动酶联仪检测时,应按仪器规定说明确定调零孔。

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第七,同一稀释度2个孔的490纳米波长光密度值的平均值,为该稀释度的光密度值,对照孔应作同样处理。

③猪瘟单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验A.材料本试验的试剂盒由中国兽药监察所提供。本抗原包括猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原和猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原,分别供检测经猪瘟弱毒疫苗免疫后产生的抗体和感染猪瘟强毒后产生的抗体之用。同时提供酶标抗体,阳性、阴性血清,酶联板及其他器材和试剂。B.试验方法第一,用包被液将猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原、猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原各做100倍稀释,以100微升分别加入做好标记的酶联板孔中,置湿盒于4℃过夜。

第二,弃去孔内液体,用洗涤液冲洗板3次,每次间隔3~5分钟,拍干。

第三,用稀释液将待检血清作400倍稀释,每孔加入100微升,同时将猪瘟阳性阴性血清以100倍稀释作对照,37℃下培育1.5~2小时。

第四,重复第二步。

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第五,用稀释液将兔抗猪免疫球蛋白G辣根过氧化物酶结合物作100倍稀释,每孔加入100微升,37℃下培育1.5~2小时。

第六,重复第二步。

第七,每孔加入底物溶液(每块板所需的底物溶液按邻苯二胺5毫克加底物缓冲液5毫升加30%双氧水18.75微升配制)100微升,室温下观察显色反应(一般阴性对照孔略微显色,立即终止反应,并以阴性孔作空白调零)。

第八,每孔加入终止液50微升,于酶联读书仪上测定490纳米波长的光密度(OD)。C.判定标准a.在猪瘟弱毒酶联板上光密度>0.2为猪瘟弱毒抗体阳性。

光密度<0.2为猪瘟弱毒抗体阴性。b.在猪瘟强毒酶联板上光密度≥0.5为猪瘟强毒抗体阳性。

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光密度<0.5为猪瘟强毒抗体阴性。

D.注意事项第一,运输单纯纯化酶联抗原时,必须使用冰盒低温运输。

第二,配制洗涤液时,应使用新鲜蒸馏水或无离子水;每次洗板后,尽量不使孔中有残余液体,以免影响结果。

第三,底物溶液临用前配置,待邻苯二胺完全溶解于底物缓冲液后再加双氧水,混匀后立即加入孔中。

第四,终止反应后,应立即读数。200.猪场兽医检验室应配备哪些器材和试剂?

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(1)设备类:猪场兽医检验室配备的主要设备有电冰箱、电热培养箱、电热干燥箱、台式离心机、超净工作台、高压灭菌锅、显微镜、蒸馏水器、微量血清振荡器、组织捣碎机等。

(2)器械类:猪场兽医检验室配备的主要器械有普通天平、研钵、铁三脚架、酒精灯、石棉网、试管架、接种棒、带盖搪瓷盘、铝饭盒、微量反应板(V型)、微量移液器(100微升、250微升)、普通剪刀、眼科剪刀、眼科镊子、长镊子、手术刀等。

(3)猪场兽医检验室配备的主要玻璃器材:有玻璃注射器、试管、刻度吸管、烧杯、三角烧瓶、玻璃漏斗、量筒、玻璃珠、载玻片、盖玻片等。

(4)试剂类:猪场兽医检验室配备的主要试剂有95%乙醇、氯化钠、氢氧化钠、碱性复红、结晶紫、沙黄、姬姆萨、甲醇、甲醛、草酸铵、甲基红、营养琼脂、麦康凯琼脂、SS琼脂、三糖铁琼脂、微量生化反应管、二甲苯、显微镜油、擦镜纸、常用猪病血清学诊断试剂盒等。

附录:猪的实用生理常数

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